导读

肥胖和超重人口数量增加

近年来，气相我国城市化和老龄化进程加快，色谱同时伴随着生活方式的法测改变，肥胖和超重人口数量增加，定沙糖尿病的格列发病率有逐年增高的趋势，沙格列汀作为一种高效的汀中二肽基肽酶-4（DPP-4）竞争性抑制剂，于2011年5月5日在中国获得上市批准（商品名，残留安立泽）用于治疗2型糖尿病，溶剂通过阻止内源性胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的气相快速降解，延缓肠促胰岛素的色谱失活，促进葡萄糖介导的法测胰岛素释放并减少餐后胰高血糖素释放，以改善餐后β细胞对葡萄糖的定沙反应。

根据ICHQ3C（R7）残留溶剂的格列指导原则，甲醇、汀中乙腈、残留二氯甲烷属于二类溶剂，异丙醇、乙酸乙酯属于三类溶剂，本实验采取气相色谱法对沙格列汀原料药中的这5种溶剂的残留量进行测定，为本品的质量研究和生产提供数据支持，为质量标准的制定提供依据。

1仪器与试剂

1.1仪器

SHIMADZUGC-2010气相色谱仪；氢火焰离子化检测器（FID）;DB-624毛细管色谱柱（30m*0.32mm1.8μm）。

1.2试剂

沙格列汀（合肥合源药业有限公司，批号：SG-190801R1、SG-190901R1、SG-190902R1）;N-甲基吡咯烷酮（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；异丙醇（色谱纯）；二氯甲烷（色谱纯）；乙酸乙酯（色谱纯）。

2方法与结果

2.1方法

2.1.1色谱条件

色谱柱：安捷伦DB-624毛细管色谱柱（30m*0.32mm1.8μm）；检测器：氢火焰离子化检测器（FID）；柱温采取程序升温，起始柱温40℃，维持8分钟，以每分钟40℃速率升温至200℃，维持13分钟；进样口温度：200℃；检测器温度：250℃；分流比：5︰1；柱流速：1.0mL/min；进样量：1.0μL；氮气流量：30mL/min；氢气流量：40mL/min；空气流量：400mL/min。

2.1.2溶液的配制

空白溶液：以N-甲基吡咯烷酮作为空白溶液。

溶剂定位溶液：取甲醇对照品、异丙醇对照品、乙腈对照品、二氯甲烷对照品和乙酸乙酯对照品各10μL，分别置10mL量瓶中，用N-甲基吡咯烷酮溶解并稀释至刻度，作为各溶剂定位溶液。

供试品溶液：取本品适量，精密称定，加N-甲基吡咯烷酮溶解并定量稀释制成每1mL中约含沙格列汀150mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取甲醇对照品、异丙醇对照品、乙腈对照品、二氯甲烷对照品、乙酸乙酯对照品适量，精密称定，加N-甲基吡咯烷酮制成每1mL中约含甲醇450μg、异丙醇750μg、乙腈61.5μg、二氯甲烷90μg和乙酸乙酯750μg的溶液，作为对照品溶液

2.2验证结果

2.2.1专属性

按“2.1.2”项下方法配制溶剂定位溶液、供试品溶液、混合对照溶液和空白溶液。按“2.1.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。试验结果表明，甲醇、异丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯间均能实现良好分离，分离度大于1.5，理论板数不低于5000，空白溶液不干扰测定，表明本方法专属性良好。

2.2.2线性

精密称取甲醇对照品451.3mg、异丙醇对照品749.0mg、乙腈对照品61.9mg、二氯甲烷对照品117.3mg和乙酸乙酯对照品751.2mg，置同一100mL量瓶中，用N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度，摇匀，得对照品母液，量取对照品母液按表1用N-甲基吡咯烷酮逐步稀释成一系列浓度。精密量取1.0μl，注入气相色谱仪，进行检测。线性结果见表2。

结果表明，甲醇，异丙醇，乙腈，二氯甲烷，乙酸乙酯在一定范围内，峰面积与浓度均成良好的线性关系。

2.2.3检测限和定量限

分别称取甲醇，异丙醇，乙腈，二氯甲烷，乙酸乙酯适量，精密称定，加入N-甲基吡咯烷酮逐级稀释成一系列浓度的溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。取信噪比约为3作为检测限溶液，取信噪比约为10作为定量限溶液，试验结果见表3。

2.2.4进样精密度

精密称取各溶剂适量，配成各定量限浓度的混合溶液，精密量取1.0μL，注入气相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图。

试验结果表明，各溶剂在定量限浓度下重复进样检测，峰面积RSD<10.0%，保留时间RSD≥1.0%，表明本方法进样精密度良好。

2.2.5准确度

取“2.2.2”项下的对照品母液，量取对照品母液1.0mL，置1mL量瓶中，加N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。

精密称取沙格列汀原料约1.5g,9份，分别置于10mL量瓶中，分别精密量取对照品母液0.5mL、1.0mL和1.5mL各3份，加N-甲基吡咯烷酮溶解并稀释至刻度，摇匀，作为50%、100%、150%限度浓度回收率供试液。按“2.1.1”项下色谱条件测定，计算回收率。试验结果见表4。

结果表明，甲醇、异丙醇、乙腈、乙酸乙酯和二氯甲烷的回收率均在85%～110%,RSD均≤10%，本方法准确度良好。

2.2.6样品测定

照“2.1.2”项下方法配制对照品溶液和供试品溶液，取1.0μL注入气相色谱仪，以峰面积按外标法计算样品中溶剂含量。结果见表5。

结果表明，3批样品中残留溶剂的含量均符合《中国药典》2020年版四部规定。

3讨论

对于残留溶剂检测通常用气相色谱进行检测，其检测方法的开发相对简单，适用范围广。进样方式一般为顶空进样或直接进样，直接进样有很大的溶剂峰，气相色谱一般会选用低沸点的溶剂，这样就会对低沸点的残留溶剂检测造成很大的干扰，因此直接进样一般用于高沸点的溶剂检测，顶空进样用于低沸点的溶剂检测。色谱柱选择毛细管色谱柱，因其分离效率高，色谱柱固定液的选择根据“相似相溶”的原理，以待分析的溶剂极性选择合适的色谱柱。

本实验采用直接进样法测定沙格列汀原料药中5种残留溶剂的含量，经实验验证，甲醇、异丙醇、乙腈、二氯乙烷、乙酸乙酯分离度良好，理论板数大于5000，空白溶液不干扰测定，系统适应性良好。各溶剂线性相关系数均大于0.99，回收率均在85%～110%。本方法简便，快速，准确，适用于沙格列汀原料药中残留溶剂的测定。

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